Stanovení hladiny celkového homocysteinu v plazmě kapalinovou chromatografií s tandemovou hmotnostní spektrometrií

Abstract

Cíl studie: Zavedení nové techniky, kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií do rutinního stanovení hladiny celkového homocysteinu v plazmě. Materiál a metoda: Metodou kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií byly analyzovány vzorky pacientů zaslané do laboratoří Onkologického Centra J. G. Mendela. Výsledky: V pozitivním multiple reaction monitoring módu byl monitorován ion vzniklý rozpadem fragmentu m/z 135,9 → 89,8 pro homocystein a m/z 140 → 90 pro interní standard, homocystein-d4. Vyvinutá LC/MS/MS metoda má následující parametry: retenční čas homocysteinu i homocystinu-d8 1,4 minuty, mez stanovitelnosti 0,5 µmol/l, mez detekce 0,1 µmol/l. Opakovatelnost byla stanovena v sérii 20 měření analýzou 2 kontrolních vzorků, na hladině 8,3 µmol/l byl variační koeficient 0,12 %, na hladině 18,2 µmol/l byla hodnota variačního koeficientu 0,71 %. Závěr: Byla zavedena vysoce selektivní, specifická a časově nenáročná technika vhodná pro rutinní stanovení hladiny celkového homocysteinu v plazmě.

Objective: To develop a new LC/MS/MS - based method for routine measurement of total homocysteine in plasma. Material and Method: Patient samples from laboratories of Cancer Centre of J. G. Mendel were analyzed by liquid chromatography with tandem mass spectrometry. Results: Ion transitions m/z 135.9 → 89.8 for homocysteine and m/z 140 → 90 for internal standard – homocysteine-d4 were monitored in the positive multiple reaction-monitoring mode. Our newly developed LC/MS/MS method has the following characteristics: retention time of homocysteine and homocystine-d8 is 1.4 min, limit of quantitation 0.5 µmol/l and limit of detection 0.1 µmol/l. Repeatability was determined by analyzing 2 plasma samples, the variation coefficients obtained were 0.12 % at concentration of 8.3 µmol/l and 0.71 % at concentration of 18.2 µmol/l. Conclusion: The selective, specific and rapid method suitable for routine determination of total homocysteine in plasma was developed.